狂犬病病毒培养技术研究进展
狂犬病作为一种几乎100%致死人兽共患传染病，对人类危害已经存在了4000近年，至今仍无有效治疗药物，可行控制方略只有暴露前免疫和暴露后防止。其中暴露前免疫重要是针对动物而言，由于人狂犬病来源于动物，只要动物狂犬病免疫防止有效，可完全控制人狂犬病发生；而暴露后防止重要用于人，由于人一旦被带毒动物咬伤，必要及时进行全程暴露后防止才干防止感染狂犬病病毒。
无论是暴露前免疫，还是暴露后防止，都离不开安全、有效、便宜疫苗。人和兽用狂犬病疫苗发展，都依赖于病毒培养技术不断进步，特别是微载体、发酵技术和无血清培养基广泛应用，把狂犬病病毒增殖滴度提高到了一种新水平，同步减少了生产成本，从而使高质量细胞纯化疫苗逐渐占领市场。
无论是老式体内培养技术，还是当前细胞培养技术，以及新型细胞发酵和生物反映器，当前都广泛应用于狂犬病病毒实验室研究或疫苗生产。本文重要就狂犬病病毒培养技术发展和新技术应用现状综述如下。
1体内培养技术
体内培养技术运用了狂犬病病毒嗜神经特性，具备敏感性好长处，可以提高病毒检测阳性率，并且易于操作，合用于不具备组织培养条件实验室。其中，小鼠脑内接种是实验室最惯用狂犬病诊断和病毒培养技术之一，其她动物如大鼠、羊、兔等，过去重要用于狂犬病神经组织疫苗生产。
禽胚胎培养技术重要是运用鸭胚和鸡胚进行狂犬病病毒培养，如鸡胚传代致弱flury-hep、flury-lep和kelev毒株。
1.1脑内培养技术
小鼠脑内接种是最惯用狂犬病病毒脑内培养技术，最早用于狂犬病野毒株分离培养是在1925年[5]。1955年，该技术开始用于疫苗生产，fuenjalida和palacios用新生鼠脑制备
出人用组织疫苗（smbv），该疫苗曾在南美洲使用了40近年，最后因使用后会引起严重神经综合症而被迫停产[1]，但是小鼠脑内接种技术却始终延用至今。当前，该技术已成为病毒分离、毒力测定及中和实验等惯用办法，所用动物普通为小鼠，乳鼠对狂犬病病毒脑内接种敏感性高于幼鼠和成年鼠[6]。小鼠中，以瑞士白化鼠（swissalbino）为一方面品种，该品种小鼠在实验室饲养容易，对狂犬病病毒高度敏感，但迄今尚未发现任何对狂犬病病毒具备遗传抗性小鼠品系，因而也可使用其她品种小鼠。实验室普通不采用野生灰鼠或家鼠，由于其野性较大，人工饲养困难。狂犬病脑内接种实验周期长，普通需观测21天，且成本较高，操作技术性强，鉴于此，有实验室已改用细胞（如小鼠成神经瘤细胞和bhk细胞等）代替小鼠进行实验。
其她脑内培养技术（大鼠、羊、兔等动物脑内培养技术）在20世纪80年代此前曾广泛应用于人狂犬病脑组织灭活疫苗生产，如semple、fermi和hempt疫苗等。但是，随着细胞疫苗发展和神经组织疫苗使用安全问题，该技术已不再惯用。
1.2禽胚胎培养技术7－10
鸭胚培养技术过去重要用于人用狂犬病疫苗生产，当前在实验室使用较少。1955年，peck等开始研制狂犬病鸭胚疫苗，该疫苗于1957年在美国上市，到1973年已成为美国重要狂犬病疫苗，但是进入80年代后，在疫苗生产中人二倍体细胞（hdc）培养取代了鸭胚培养技术。
在狂犬病病毒适应鸡胚培养研究发现，持续传40～50代时，获得低胚传代株（flury-lep）对小鼠、大鼠和仓鼠进行脑内或肌肉接种时仍具备致病性，豚鼠脑内接种也可感染，但肌肉接种时则无致病力；家兔脑内和肌肉注射均不发病；犬肌肉接种也不发病。但是，病毒在传代176至182代时（flury-hep）大某些毒力会丧失，此时将病毒脑内接种成年鼠、兔、犬时，均无致病性。因而，普通高代次flury-hep推荐在牛和猫中使用，flury-lep仅用于犬。kelev株鸡胚疫苗系经鸡胚传代60～70次病毒，该病毒对仓鼠、豚鼠和兔脑内和肌肉接种均不产生感染症状；以高浓度病毒对犬进行肌肉接种，也不浮现感染症
状。flury和kelev株均适于在鸡胚中生长，过去始终用于犬狂犬病疫苗生产，其中flury株在世界范畴内广泛使用。
鸭胚和鸡胚接种基本一致，选用培养7天健康胚，将狂犬病病毒毒液接种到卵黄囊内，鸭胚培养10～14d，鸡胚培养9～10d。
2.体外培养技术
19，noguchi和levaditi初次将组织培养技术用于狂犬病病毒研究。1930年，stoel将狂犬病病毒在移植于兔血浆凝块中鸡胚脑和心脏内培养了5代，病毒感染力没有丧失。atanasieu等运用小鼠食管膜瘤细胞系（一种非神经细胞）培养了狂犬病病毒街毒株和固定毒株，初次在细胞培养系统中报道了类似于negri小体胞浆内包涵体。
人用狂犬病细胞培养灭活疫苗研究始于1964年,该项研究表白，人二倍体细胞株wi-38株可以作为狂犬病固定毒pm株适应细胞，用于疫苗生产。1967年，merieux研究所开始运用人二倍体体细胞进行疫苗研发。1974年，人二倍体细胞培养灭活疫苗在法国批准使用，1978年开始商业化生产。
2.1原代细胞培养技术
前苏联以狂犬病病毒vnukovo-32株感染原代地鼠肾细胞（phkc），经紫外灭活后制备狂犬病疫苗，国内则以原代地鼠肾细胞（phkc）培养狂犬病固定毒北京株，经甲醛灭活制备狂犬疫苗，重要用于暴露后治疗，其年需求量也相称大。
尚有某些类似疫苗是在原代胎牛肾细胞和犬肾细胞上培养并制备。其中原代胎牛肾细胞（fbkc）培养疫苗适应毒株是巴斯德固定株pv-31，于1984年在法国批准用于暴露后治疗，1987年后来不再生产。有报道显示，fbkc疫苗有较好耐受性和免疫原性，抗体反映类似于hdc疫苗。原代犬肾细胞疫苗适应株是狂犬病固定毒pm株，pm株对人二倍体细胞也适应。